Listeria monocytogenes. Serotipado molecular de los siete serotipos principales 1/2a, 1/2b; 1/2c; 3a; 3b; 3c y 4b.

Listeria es un género de bacilos grampositivos, anaerobio facultativo, que incluye seis especies: Listeria monocytogenes, L. ivanovii, L. seeligeri, L. innocua, L. welshimeri y L. grayi. De estas especies, L. monocytogenes es patógena para el hombre y los animales. L ivanovii (antes L. monocytogenes ser. 5), sólo es patógena para los animales ungulados como ovejas y ganado. Las otras 4 especies son saprófitas y están adaptadas para vivir en suelos y vegetales en descomposición. Por su tolerancia a los cambios de pH, a temperaturas extremas y concentraciones salinas, son capaces de sobrevivir en muchos alimentos procesados. Por su ubicuidad puede contaminar alimentos de distintos tipos y orígenes como vegetales, leche, quesos, productos cárnicos, pescados, y comidas preparadas listas para comer o calentar (Ready-to-Eat o Heat-to-Eat).

La ingestión de alimentos contaminados es la principal fuente de infección tanto para los casos esporádicos como para los brotes epidémicos.

La especie patógena humana, L. monocytogenes, afecta preferentemente a un grupo de población más susceptible: embarazadas, neonatos, ancianos o inmunodeprimidos, en los que puede provocar infecciones graves como septicemia, meningitis, encefalitis, abortos y ocasionalmente muerte (20 a 30% de los casos). Además, puede provocar en la población general brotes esporádicos de gastroenteritis febriles, no invasivos, autolimitados, manifestados además de por la fiebre, por náuseas y diarreas.

La mayoría de los casos son esporádicos, pero también se han descrito brotes por determinados alimentos muy diversos como: ensalada de col (coleslaw) y carnes frías (deli meat) en Canadá; quesos blancos en Suiza; patés de carne desmenuzada (rilletes) en Francia;  melón cantaloupe o leche achocolatada en EE.UU.; mantequilla o trucha ahumada en Finlandia; ensalada de arroz o maíz dulce en Italia; cerdo gelatinizado en Austria; entre otros.

L. monocytogenes incluye un amplio espectro de cepas que difieren en su virulencia y patogenicidad. Muchas cepas de L. monocytogenes son virulentas y capaces de provocar morbilidad y mortalidad, pero sin embargo, otras no son virulentas y son incapaces de provocar una infección en mamíferos. Para diferenciar las cepas tradicionalmente se han utilizado los antígenos somáticos (O) y los antígenos flagelares (H), con los que se definieron hasta 13 serotipos, siendo los más frecuentes 1/ 2 a, 1/ 2b, 1/ 2c, 3 a, 3b, 3c, 4 a, 4b, 4c, 4d, y 4e. Estos serotipos han constituido la base de su diferenciación, y así se han descrito los serotipos implicados en distintas infecciones y brotes. De esos serotipos, alrededor del 98% de los casos de listeriosis son causados por 4 de ellos: 4b, 1/2a, 1/2b y 1/2c. Tampoco se  distribuyen los serotipos por igual en alimentos, ambientes y muestras clínicas. En las muestras clínicas humanas el 49% de aislados son del serotipo 4b, mientras que en los alimentos sólo el 8% de los aislados son del serotipo 4b. Así mismo, el mismo serotipo puede provocar los dos tipos de procesos: enfermedad invasiva o fiebre gastrointestinal. Algunos  serotipos, como el 4a, se encuentran en alimentos y animales, pero es raro en casos de listeriosis humana.

El serotipado convencional mediante el uso de antisueros específicos para los antígenos somáticos (O) y flagelares (H), en general mediante pruebas de aglutinación, era la primera línea de subtipado que solía hacerse en los laboratorios de seguridad alimentaria. Este método de serotipado está basado en una  reacción antígeno-anticuerpo, y tiene algunos inconvenientes, como son: laborioso y subjetivo que requiere experiencia, escasa reproducibilidad por la variabilidad en la calidad de los antisueros utilizados, limitado por el coste, disponibilidad y coste de los antisueros, y tipificación de los aislados. La subjetividad en la lectura de los resultados y su reproducibilidad trató de obviarse con métodos de ELISA, pero tampoco ha sido la solución.

Para diferenciar los serotipos patógenos se han realizado varios tipos de ensayos como bioensayos in vivo inoculando animales de experimentación; bioensayos in vitro inoculando cultivos celulares; pruebas para detectar determinadas proteínas; caracterización de su ADN mediante electroforesis de campos pulsados (PFGE: Pulsed-Field Gel Electrophoresis), etc.

Gracias a la secuenciación completa del genoma se establecieron varios linajes de L. monocytogenes, incluyéndose en cada linaje algunos de los serotipos identificados mediante serotipado convencional. Ello trató de aplicarse en métodos de macroarrays para detectar con sondas los genomas secuenciados de algunos serotipos. Se han establecido varios linajes (I, II, III), en cada uno de los cuales se incluían varios serotipos (citados por Datta, AR, y col. Recent developments in molecular sub-typing of Listeria monocytogenes. Food Additives & contaminants, Part A, 2013, 30: 1437-1445), o cuatro linajes (I, II, III, IV) (citados por Shen J., y col. Molecular subtyping and virulence gene analysis of Listeria monocytogenes isolated from food. Food Microbiol. 2013, 35: 58-64). Los tres linajes iniciales fueron subdivididos fueron en cinco grupos filogenéticos: I.1, I.2, II.1, II.2, y III (citado por Doumith M., y col. Differentiation of the major Listeria monocytogenes serovars by multiplex PCR. J. Clin. Microbiol. 2004, 42: 3819-3822). Consideramos que la identificación de los linajes o de los grupos filogenéticos, aunque hayan servido para agrupar en cada uno de ellos a varios serotipos diferentes por su similitud genómica, no permiten un seguimiento epidemiológico de cada serotipo y su implicación en un caso esporádico o brote epidemiológico.

Hoy día, es posible diferenciar serogrupos y serotipos de Listeria monocytogenes mediante PCR, que permite identificar los genes diferentes existentes en la mayoría de los serotipos de interés patógeno y epidemiológico, y así su diferenciación de interés epidemiológico.           

Pruebas realizadas en IVAMI:

  • Identificación molecular de Listeria, y de la especie L. monocytogenes mediante los genes específicos  correspondientes.
  • Serotipado molecular para diferenciar, mediante amplificación por PCR de los genes correspondientes, los principales serotipos: 1/2a, 1/2b, 1/2c, 3a, 3b, 3c, y 4b. 

Muestras necesarias 

  • Aislado (cepa) de Listeria monocytogenes en cultivo.

Conservación de la muestra

  • Temperatura ambiente o refrigerada.

Plazo de entrega de resultados

  • 48 horas.

Coste de la prueba