Helicobacter pylori – Genotipos (PCR y secuenciación)

Información 23-2-16.

Helicobacter pylori puede provocar cuadros de gastritis aguda o crónica, úlcera duodenal, úlcera gástrica, adenocarcinoma gástrico y linfomas de la mucosa (MALT: Mucosal Associated Lymphoid Tissue).

Esta bacteria, sin embargo se encuentra muy distribuida en la población humana. En los países subdesarrollados puede llegar a encontrarse hasta en el 80% de la población, mientras que en los países desarrollados se encuentra entre el 20 a 50% de la población. Estas diferencias de prevalencia se han atribuido principalmente a las diferentes condiciones socio-sanitarias existentes entre los países subdesarrollados y desarrollados, que facilitarían la diseminación entre la población en los primeros.

A pesar de esta distribución tan amplia en la población las tasas de infección no se corresponden con tasas similares de morbilidad atribuida a esta bacteria. Ello es debido a que existen diferencias de patogenicidad entre las distintas cepas de esta bacteria, ya que algunos de los factores de patogenicidad no se encuentran en todas las cepas.

Los principales factores de patogenicidad de esta especie que le permiten la invasión, la colonización y la degeneración celular son: 1) movilidad por flagelos polares que le facilita el contacto con la mucosa; 2) la enzima ureasa producida, que por una parte le permite sobrevivir en el ambiente ácido donde se ubica, gracia a la descomposición de la urea secretada por la mucosa con la producción de amonio y carbónico, de los que el primero le permite crear un ambiente alcalino en su entorno, y por otra parte es  tóxico para las células de la mucosa; 3) la citotoxina vacuolizante (VacA: Vacuolating Cytotoxin A); y 4) la citotoxina asociada al gen A (CagA: cytotoxin associated gen A).

Entre los factores de virulencia más importantes se encuentran la citotoxina vacuolizante A (VacA) y la citotoxina asociada al gen A (CagA). Las diferencias existentes en los genes codificantes de ambas toxinas permiten diferenciar genotipos dentro de esta misma especie, que se han podido correlacionar con la patología provocada por las cepas diferentes.

La citotoxina vacuolizante (VacA), es una proteína de 88 kDa formada a partir de una proteína precursora de 140 kDa. Esta citotoxina puede encontrarse en todas las cepas de H. pylori, y sería la responsable de la aparición de vacuolas citoplásmicas y aumento de permeabilidad que llevan al daño de las células epiteliales de la mucosa. Además, la citotoxina VacA se considera responsable de la inducción de inflamación, estimulo de la apoptosis, inhibición de la multiplicación celular y daño de las uniones intercelulares. Esta citotoxina está presente en casi todas las cepas de H. pylori, pero es  muy polimórfica, y está constituida por dos regiones variables, la región señal (s: signal región) localizada en el extremo N-terminal de la proteína, y la región media (m: middle región). Hay dos tipos principales de “s”: s1 y s2, y tres subtipos S1 menores (s1a, s1b y s1c). La región “m” también puede diferenciarse en dos tipos principales (m1 y m2), y dos subtipos menores (m1a y m1b). Además, se ha diferenciado una región intermedia “i”, con dos alelos diferentes (i1 e i2). Recientemente se ha descrito otra región relacionada con la patogenicidad, situada entre las regiones “i” y “m”, y se ha denominado región “d”, diferenciándose “d1” (sin deleción) y “d2” (con una deleción de 81 pb). La región “d1” sería un factor de riesgo para cáncer gástrico y enfermedad ulcerosa péptica en las cepas Occidentales y del Lejano Oriente. Según la combinación de los diferentes genotipos y subtipos de la región VacA, pueden establecerse diferentes genotipos con diferente patogenicidad: s1am1 y s1bm1, productores de mayores cantidades de citotoxina VacA, se consideran los más virulentos, causantes de mayor daño epitelial, que serían los relacionados con cuadros de gastritis agudas, úlcera péptica y cáncer gástrico. Por el contrario, el genotipo s1m2 produce poca cantidad de toxina vacuolizante. Los genotipos s2m1 y s2m2, no se consideran toxigénicos, debido a una extensión hidrofílica de 12-aminácidos en la forma s2,  y serían incapaces de generar vacuolas intracelulares. Estos dos genotipos suelen encontrarse en la úlcera gástrica.  

La citotoxina asociada al gen A (CagA), es una proteína de 125 a 145 kDa, y se encuentra n el 60 a 90% de las cepas de H. pylori. La proteína CagA es muy inmunogénica e induciría metaplasia, displasia y cáncer gástrico. Se acepta que la presencia de la citotoxina CagA en una cepa colonizante implica un mayor riesgo de gastritis y cáncer gástrico. Además, de la presencia o ausencia de esta citotoxina, también influye la estructura de la proteína. En esta proteína se han descrito varios motivos EPIYA, como EPIYA-ABC y EPIYA-ABD. En los países occidentales, predomina el motivo EPIYA-ABC, que se corresponden con menor incidencia de gastritis, úlcera gástrica, úlcera duodenal y cáncer gástrico, mientras que en los países del Lejano Oriente predomina el motivo EPIYA-ABD, que se relaciona con mayor incidencia de tales procesos.

Se han descrito otros genes relacionados con la patogenicidad, como el gen iceA, con dos alelos iceA1 e iceA2. El gen iceA se expresaría tras el contacto con el epitelio durante la fijación de H. pylori a la mucosa gástrica. La expresión de iceA1 estaría asociada con mayor incremento de IL-8 y mayor inflamación de la mucosa.     

Pruebas realizada en IVAMI

  • Determinación de los genotipos de H. pylori: (“s1a, s1b, s1d”, “m1a, m1b, m2”, “d1, d2”, “variante occidental y del Lejano Oriente”): PCR y secuenciación

Tipo de muestras recomendadas

  • Cepa aislada en cultivo, o en su defecto biopsia de mucosa gástrica sin fijar.

Condiciones de envío

  • Cepa aislada en cultivo: temperatura ambiente o refrigerada en contenedor isotérmico.
  • Biopsia gástrica: temperatura refrigerada en contenedor isotérmico.

Plazo de entrega de resultados

  • 48 a 72 horas.

Coste de la prueba