Pruebas para detectar e identificar larvas de mejillones por métodos moleculares (PCR y secuenciación).

 

Información (11-04-14)

 

Los mejillones son una de las especies más recogidas y comercializadas de lo moluscos bivalvos, ya que se encuentran presentes a lo largo de las costas de muchos países de climas templados, tanto del hemisferio Norte, como del hemisferio Sur. La producción de mejillones depende de las fuentes naturales donde se encuentren sus larvas, por lo que estas fuentes se consideran un factor limitante para la expansión de los cultivos. Los lugares donde se encentran los lecos de semilleros varían espacialmente y temporalmente de un año a otro, y se requieren métodos para buscar e identificar nuevas fuentes de semillas que peritan extender los lugares de producción.

 

Los mejillones producen larvas planctónicas en las que se dispersan, a partir de los adultos para poder detectar las larvas en los lugares de semilleros. La identificación morfológica es muy difícil, y requiere una enorme experiencia para poder diferenciar cualquiera de las especies de larvas de moluscos bivalvos que se encontrasen presentes.

 

Existen varias especies:Mytilus edulis,Mytilus galloprovincialis,Mytilus chilensis,Mytilus trosellus,Perna canaliculus, yPerna viridis, que difieren en sabor y texturas, por lo que es importante poder identificar y autentificar las especies comercializadas para confirmar un etiquetado correcto de los productos comercializados. Hay que tener en cuenta, que aunque los mejillones crudos se comercializan con sus valvas, y éstas ayudan a su diferenciación, como ocurre con las diferencias por el color de sus valvas,Mytilusspp. (balvas de color negro-violeta) yPerna canaliculus(balvas de color verdoso) por el color de las valvas, los mejillones congelados o enlatados se comercializan sin balvas.

 

Se han desarrollado varios métodos moleculares para poder diferenciar las larvas, como por ejemplo, la electroforesis de aloenzimas, la diferenciación antigénica mediante métodos inmunológicos, y métodos de ADN como los RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism), SSCP (Single Stranded Conformational Polymorphism), y varios métodos de PCR (Polymerase Chain Reaction). De ellos, muchos se han aplicado para diferenciar la especieMytilus edulisde mejillones.

 

Para establecer diferencias utilizando métodos de análisis de ADN puede utilizarse el ADN nuclear (ADN genómico), o el ADN mitocondrial (mtDNA). Ambos permiten diferenciar entre familias, géneros, especies  poblaciones. Sin embargo, hay que tener en cuenta que el ADN nuclear ribosomal (el que codifica el rRNA ribosómico). Evoluciona más lentamente que el mtDNA, por lo que en principio debe considerarse más apropiado para realizar comparaciones y análisis filogenéticos de géneros y familias, mientras que el mtDNA sería más adecuado para establecer diferencias entre especies y poblaciones. El mtDNA tiene la ventaja frente al ADN nuclear de que existe mayor número de copias por células, y es mejor cuando se requiere mayor sensibilidad. Los genes nucleares ribosomales, como el 18S rRNA) son los más usados para fines diagnósticos y filogenéticos porque están compuestos por varias secuencias similares. Sin embargo, el genoma mitocondrial del 16s rRNA (16S rDNA) es el preferido, ya que tiene una baja tasa de mutación comparada con otros genes del mtDNA.

 

Pruebas realizadas en IVAMI

 

Identificación de larvas en plancton, o de ejemplares adultos, con o sin valvas, mediante amplificación con PCR de gen de 18S rNA (16S rDNA) de ADN genómico y de gen de 16S rRNA mitocondrial (16S rDNA), seguido de secuenciación y análisis de secuencia.

 

Muestra recomendada:

 

Muestra de agua con plancton (volumen suficiente para filtración y recogida de plancton, por ejemplo 1.000 mL)

 

Conservación y envío de la muestra:

 

Refrigeración.

 

Coste de la prueba:

 

Consultar a ivami@ivami.com